人原钙黏素1 PCDH1 ELISA试剂盒
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
操作步骤
1标准品样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50UL:
2.样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样
品稀释液40μ1.然后再加待测样品10μ1(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加干酶标板孔底部量尽量不触及孔壁,轻轻异动混匀。
3.加酶:每孔加入酶标试剂100μ1,空白孔除外。
4.温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,用干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μ1,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
8.终止:每孔加终止液50μ1,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。